Criblage haut débit de souches


Etapes d'un criblage de mutants sur la composition en lipides.
 

Criblage d'une banque de mutants sur la composition en lipides

  1. Constitution des banques de mutants
  2. Culture cellulaire en microplaques de 96 puits
  3. Criblage des cellules accumulatrices de TAG par cytomètrie en flux (utilisation d'un marqueur lipophile fluorescent: le Nile Red)
  4. Validation par HPTLC (High Performance Thin Layer Chromatography) Extraction des lipides en microplaque.
  5. Evaluation des profils lipidiques par GC-FID ou GC-MS


mesure de la fluorescence
Dispositif utilisé pour le criblage de mutants sur la fluorescence

profils de variation du signal de fluorescence
Représentation de différents profils de variation du signal au cours du temps
 

Criblage d'une banque de mutants sur la fluorescence de la chlorophylle

Un système permettant de suivre la fluorescence de la chlorophylle au cours du temps, sur boite de culture a été mis au point avec la collaboration de Bernard Genty et Ilja Reiters (LEMP-CEA Cadarache).

Ce dispositif est basé sur l’excitation de la chlorophylle par une couronne de diodes et l'acquisition par une caméra des variations du signal de fluorescence au cours du temps.
Il a permis de cribler une banque de plus de 3000 mutants de Chlamydomonas afin d’isoler des mutants de la photosynthèse (Ghysel et al. , en préparation).